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病毒包裝

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  慢病毒包裝
  慢病毒(Lentivirus) 載體是以HIV-1 (人類免疫缺陷Ⅰ型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。
  對在體外實驗及體內實驗的研究中,慢病毒己經成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一, 并且正在獲得越來越廣泛的應用。
 
  慢病毒包裝系統組成
  慢病毒包裝系統一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。
  慢病毒表達載體,即通常所說的穿梭載體,包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。而慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染293T細胞,在細胞中進行病毒的包裝, 包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染。
  現在的慢病毒包裝系統一般都是三質粒或四質粒包裝系統。其中四質粒系統比三質粒系統在生物安全性上更好一些,所以應用較多。
  纖然生物提供慢病毒載體構建,RNAi(shRNA)、miRNA、過表達和干擾慢病毒包裝,以及基于慢病毒技術的穩定細胞系構建服務。
  纖然生物采用第三代 4質粒慢病毒包裝系統,生物安全性更高;
  采用VSV-G包膜,宿主范圍更廣;
  產生的慢病毒滴度高,可達108~1010TU/mL;
  各種慢病毒穿梭載體可供選擇:過表達、ShRNA、miRNA、Tet誘導表達載體等;
  可帶有熒光報告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和藥篩標記基因(Puro、Neo、Hygromycin等),有多種啟動子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供選擇;
  3~6周內即可完成載體構建以及病毒包裝服務。
 
 
  備注:
  ■ 慢病毒包裝:病毒量≥1×108 TU;腺相關病毒包裝:病毒量≥1×1012 GC。
  ■ 免費基因調取,贈送等量病毒對照組
 
 
 
  腺病毒包裝
  腺病毒是一種無包膜的球型結構的病毒,遺傳物質為線型雙股DNA形式。
 
  腺病毒的特點
  (1)感染范圍廣對人致病性低;
  (2)對增殖和非增殖細胞均具有感染性;
  (3)能有效進行增殖;
  (4)病毒滴度高;
  (5)不整合到染色體中,無插入致突變性;
  (6)外源基因裝載容量大。由于腺病毒的這些特點使其廣泛地應用于體外基因轉導、體內接種疫苗、和基因治療等各個領域。
 
  纖然生物采用的AdMax重組腺病毒系統通過Cre/loxP 獲得重組病毒,這個過程發生在HEK293細胞中,從而避免在細菌中重組。將攜帶外源基因的腺病毒穿梭質粒與攜帶腺病毒基因組的包裝質粒共轉染包裝細胞,借助Cre/loxP系統的作用實現重組產生腺病毒。該系統有多種優勢,包括克服了傳統共轉染系統重組效率低的缺點;也避免了細菌重組中的種種不確定性;操作簡單,重組效率高,實現了快速高效的腺病毒包裝。另外,研究者還可以根據不同的實驗需求構建相應的腺病毒穿梭載體。
 
 
  技術特點
  1、復制缺陷型腺病毒顆粒,對分裂期和非分裂期細胞均有感染作用;
  2、無需任何轉染試劑,操作簡單;
  3、適用于在難轉染的細胞中進行RNA干擾、過表達特定基因或過表達特定microRNA研究和In vivo 實驗;
  4、不適用于感染腺病毒以后細胞發生死亡和分化的敏感細胞和需要長期穩定表達目的基因的實驗
 
 
 
 
 

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